百日咳桿菌(Bordetella Pertussis，BP)是百日咳的致病菌，百日咳作為多種臨床呼吸道傳染性疾病之一，主要是由感染百日咳桿菌所致。該疾病的臨床表現(xiàn)為痙攣性、陣發(fā)性咳嗽，咳嗽癥狀逐漸加重，最終產(chǎn)生雞啼樣吸氣性吼聲。百日咳發(fā)病后病程通常會延續(xù)2~3個月，病程綿長，該疾病的名稱也是由此而來。傳播途徑主要以呼吸道飛沫傳播為主，傳染源包括帶菌者、隱性感染者以及該病患兒。該疾病在5歲以下兒童中易復發(fā)，而在臨床研究以及本研究數(shù)值中發(fā)現(xiàn)，雖任何年齡均有機會患上百日咳，但一般仍以兒童為大多數(shù)，其中6個月以下的兒童為該疾病患染高發(fā)人群。按照其病程可將該疾病分為3期。
(1)發(fā)病1~2周為卡他期，出現(xiàn)咳嗽、低熱、噴嚏、流涕等癥狀，咳嗽癥狀會隨著病情進展逐漸加重;
(2)發(fā)病3~4周為痙咳期，出現(xiàn)痙攣性和陣發(fā)性咳嗽;
(3)病程結(jié)束1~2周為恢復期，咳嗽頻率逐漸降低，未再發(fā)生陣發(fā)性痙咳。
該疾病可發(fā)生于全年，季節(jié)交替是發(fā)病高峰時間段，主要以7~9月夏秋兩季為主。有臨床研究顯示，該疾病在農(nóng)村的發(fā)病率高于城市，可能與防范意識、生活衛(wèi)生習慣密切相關(guān)。由于百日咳菌苗免疫接種的不斷增加，發(fā)病率也逐漸降低。但是近幾年該疾病又出現(xiàn)流行趨勢，且城市患病人口不斷增加。
目前，臨床上常用細菌培養(yǎng)和血清學篩查等方法對百日咳桿菌進行檢測，但百日咳桿菌分離培養(yǎng)難度大，培養(yǎng)周期長，而血清學篩查存在靈敏性低，特異性不高的缺陷，這些因素限制了上述兩種百日咳桿菌檢測方法在臨床上的應用。
在實驗室檢查方面，與細菌學和血清學方法相比，核酸檢測方法對百日咳致病菌的診斷具有較高的敏感性和特異性，對于不符合臨床診斷標準的非典型病例、隱性感染者以及其他非百日咳鮑特菌引起的百日咳具有不可替代的意義，是臨床檢測百日咳的重要手段。
利用實時熒光PCR技術(shù)，以百日咳桿菌基因組DNA高度保守區(qū)為靶區(qū)域，設計一對特異性引物和一條特異的熒光探針。在PCR反應體系中，在加入一對引物的同時加入一條特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR反應剛開始時，探針結(jié)合在靶序列DNA一條單鏈上;PCR擴增時，Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步，實現(xiàn)對樣本中百日咳桿菌核酸的定性檢測。樣本要求:
1.適用人群:疑似百日咳桿菌感染患者。
2.適用樣本類型:口咽拭子、鼻咽拭子。
3.樣本保存和運送:所采集的樣本應盡可能快地送至檢驗室進行檢測，樣本在2-8°C條件下保存不超過3天。